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2013-11
PCR技術(shù)專題：PCR技術(shù)原理、實(shí)驗(yàn)步驟和應(yīng)用
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的原理。2.掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理PCR技術(shù)，即聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction，PCR）是由美國(guó)PECetus...
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2013-11
轉(zhuǎn)染專題：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的幾個(gè)實(shí)驗(yàn)方法
摘要：本實(shí)驗(yàn)介紹了脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的幾個(gè)方法。實(shí)驗(yàn)原理脂質(zhì)體（LR）試劑是陽(yáng)離子脂質(zhì)體DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前條件下zui方面的轉(zhuǎn)染方法之一...
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2013-11
感受態(tài)專題：感受態(tài)細(xì)胞的制備及溶液配制
實(shí)驗(yàn)試劑LB培養(yǎng)基，KB培養(yǎng)基，10%甘油，液氮，0.1MCaC12溶液實(shí)驗(yàn)設(shè)備超凈工作臺(tái)，搖床，離心機(jī)，250mL離心瓶，0.5mL的離心管實(shí)驗(yàn)材料大腸桿菌，農(nóng)桿菌和假單胞桿菌實(shí)驗(yàn)步驟1.電擊感受態(tài)...
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2013-11
感受態(tài)專題：真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟
1.在6孔板中接種1~3×105細(xì)胞/孔，加入2ml*培養(yǎng)基，置CO2孵箱中37℃培養(yǎng)過。2.待細(xì)胞長(zhǎng)到50-80%單層時(shí)，在無(wú)菌離心管中配制如下溶液：i.溶液A：將4?g待轉(zhuǎn)染的超純DNA稀釋到25...
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2013-11
感受態(tài)專題：轉(zhuǎn)化克隆的篩選和鑒定
1．目的學(xué)會(huì)用酶切法或PCR法篩選重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化成功的克隆菌。2．原理利用轉(zhuǎn)化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質(zhì)粒的菌落克隆。再?gòu)倪@些菌落中鑒定出質(zhì)粒上帶有外源基因插入片斷的克隆菌落。3．器材旋...
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2013-11
感受態(tài)專題：細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
原理：通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法及電穿孔等基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將靶基因?qū)爰?xì)胞，一般在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)左右，靶基因即可在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?8小時(shí)后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用：觀察目的基因及...
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2013-11
感受態(tài)專題：電轉(zhuǎn)化流程
一、電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的制備1.用槍頭挑取單克隆菌落，投入盛有10mlLB液體培養(yǎng)基的50ml離心管中。（同時(shí)做培養(yǎng)基和槍頭的空白對(duì)照）2.37℃，220rpm，培養(yǎng)14-16個(gè)小時(shí)。3.第二天，以1：...